Se deposita el suero absorbido en un portaobjetos que tiene fijado T. Pallidum. Si en el suero problema existen anticuerpos inespecíficos se produce la formación de complejos antígeno-anticuerpo. Una vez lavado, para eliminar componentes extraños a la reacción, se añade el conjugado que se fija a los anticuerpos antitreponémicos, por lo que se visualizarán en el microscopio de fluorescencia.