Web of Science: 14 cites, Scopus: 15 cites, Google Scholar: cites
Specific growth rate governs AOX1 gene expression, affecting the production kinetics of Pichia pastoris (Komagataella phaffii) P-driven recombinant producer strains with different target gene dosage
Garrigos, Javier (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament d'Enginyeria Química, Biològica i Ambiental)
Nieto-Taype, Miguel Angel (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament d'Enginyeria Química, Biològica i Ambiental)
Gasset Franch, Arnau (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament d'Enginyeria Química, Biològica i Ambiental)
Montesinos Seguí, José Luis (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament d'Enginyeria Química, Biològica i Ambiental)
Garcia-Ortega, Xavier (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament d'Enginyeria Química, Biològica i Ambiental)
Valero Barranco, Francisco (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament d'Enginyeria Química, Biològica i Ambiental)

Data: 2019
Resum: The P-based expression system is the most widely used for producing recombinant proteins in the methylotrophic yeast Pichia pastoris (Komagataella phaffii). Despite relevant recent advances in regulation of the methanol utilization (MUT) pathway have been made, the role of specific growth rate (µ) in AOX1 regulation remains unknown, and therefore, its impact on protein production kinetics is still unclear. The influence of heterologous gene dosage, and both, operational mode and strategy, on culture physiological state was studied by cultivating the two P-driven Candida rugosa lipase 1 (Crl1) producer clones. Specifically, a clone integrating a single expression cassette of CRL1 was compared with one containing three cassettes over broad dilution rate and µ ranges in both chemostat and fed-batch cultivations. Chemostat cultivations allowed to establish the impact of µ on the MUT-related MIT1 pool which leads to a bell-shaped relationship between µ and P-driven gene expression, influencing directly Crl1 production kinetics. Also, chemostat and fed-batch cultivations exposed the favorable effects of increasing the CRL1 gene dosage (up to 2. 4 fold in q ) on Crl1 production with no significant detrimental effects on physiological capabilities. P-driven gene expression and Crl1 production kinetics in P. pastoris were successfully correlated with µ. In fact, µ governs MUT-related MIT1 amount that triggers P-driven gene expression-heterologous genes included-, thus directly influencing the production kinetics of recombinant protein.
Ajuts: Ministerio de Economía y Competitividad CTQ2016-74959-R
Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca 2017/SGR-1462
Drets: Aquest document està subjecte a una llicència d'ús Creative Commons. Es permet la reproducció total o parcial, la distribució, la comunicació pública de l'obra i la creació d'obres derivades, fins i tot amb finalitats comercials, sempre i quan es reconegui l'autoria de l'obra original. Creative Commons
Llengua: Anglès
Document: Article ; recerca ; Versió publicada
Matèria: AOX1 promoter ; Heterologous gene dosage ; Transcription analysis ; Pichia pastoris ; Gene expression/regulation ; MIT1 ; Specific growth rate influence ; Operational mode
Publicat a: Microbial cell factories, Vol. 18 (November 2019) , art. 187, ISSN 1475-2859

DOI: 10.1186/s12934-019-1240-8
PMID: 31675969


15 p, 1.6 MB

El registre apareix a les col·leccions:
Articles > Articles de recerca
Articles > Articles publicats

 Registre creat el 2020-07-06, darrera modificació el 2024-03-20



   Favorit i Compartir