Targeted knockdown of ATM, ATR, and PDEδ increases Gag HIV-1 VLP production in HEK293 cells
Díaz-Maneh, Andy (Universitat Autònoma de Barcelona)
Pérez-Rubio, Pol (Universitat Autònoma de Barcelona)
Rigau Granes, Cristina (Universitat Autònoma de Barcelona)
Bosch Molist, Laia (Universitat Autònoma de Barcelona)
Lavado-García, Jesús (Universitat Autònoma de Barcelona)
Gòdia, Francesc (Universitat Autònoma de Barcelona)
Cervera Gracia, Laura (Universitat Autònoma de Barcelona)

Data:	2025
Resum:	Several strategies have been developed in recent years to improve virus-like particle (VLP)-based vaccine production processes. Among these, the metabolic engineering of cell lines has been one of the most promising approaches. Based on previous work and a proteomic analysis of HEK293 cells producing Human Immunodeficiency Virus-1 (HIV-1) Gag VLPs under transient transfection, four proteins susceptible of enhancing VLP production were identified: ataxia telangiectasia mutated (ATM), ataxia telangiectasia and rad3-related (ATR), DNA-dependent protein kinase catalytic subunit (DNA-PKcs), and retinal rod rhodopsin-sensitive cGMP 3',5'-cyclic phosphodiesterase subunit delta (PDEδ). The knockdown of ATM, ATR, and PDEδ in HEK293 cells increased HIV-1 VLP titers in the supernatant by 3. 4-, 2. 1-, and 2. 2-fold, respectively. Also, possible metabolic synergies between plasmids were investigated by statistical design of experiments (DoE), enabling us to identify the optimal production strategy, that was further demonstrated at lab-scale stirred tank bioreactor operated in perfusion, significantly increasing both VLPs specific and volumetric productivities to 8. 3 × 103 VLPs/cellxday and 7. 5 × 1012 VLPs/Lxday, respectively.
Ajuts:	Agencia Estatal de Investigación PID2022-139019OB-I00 Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca 2021/SGR-00143 Generalitat de Catalunya 2021/DI-009
Nota:	Altres ajuts: acords transformatius de la UAB
Drets:	Aquest document està subjecte a una llicència d'ús Creative Commons. Es permet la reproducció total o parcial, la distribució, la comunicació pública de l'obra i la creació d'obres derivades, fins i tot amb finalitats comercials, sempre i quan es reconegui l'autoria de l'obra original.
Llengua:	Anglès
Document:	Article ; recerca ; Versió publicada
Matèria:	VLP ; HEK293 ; Transfection ; ShRNA ; ATM
Publicat a:	Applied microbiology and biotechnology, Vol. 109 (January 2025) , art. 1, ISSN 1432-0614

DOI: 10.1007/s00253-024-13389-8
PMID: 39747723

18 p, 1.7 MB

El registre apareix a les col·leccions:
Articles > Articles de recerca
Articles > Articles publicats