Selecting subpopulations of high-quality protein conformers among conformational mixtures of recombinant bovine MMP-9 solubilized from inclusion bodies
Carratalá, José Vicente (Universitat Autònoma de Barcelona. Institut de Biotecnologia i de Biomedicina "Vicent Villar Palasí")
Gifre-Renom, Laia (Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimentàries. Departament de Producció de Remugants)
Roca-Pinilla, Ramon (Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimentàries. Departament de Producció de Remugants)
Villaverde Corrales, Antonio (Universitat Autònoma de Barcelona. Institut de Biotecnologia i de Biomedicina "Vicent Villar Palasí")
Arís i Giralt, Anna (Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimentàries. Departament de Producció de Remugants)
Garcia-Fruitos, Elena (Institut de Recerca i Tecnologia Agroalimentàries. Departament de Producció de Remugants)
Sanchez, Julieta M. (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia)
Ferrer-Miralles, Neus (Universitat Autònoma de Barcelona. Institut de Biotecnologia i de Biomedicina "Vicent Villar Palasí")

Fecha:	2021
Resumen:	A detailed workflow to analyze the physicochemical characteristics of mammalian matrix metalloproteinase (MMP-9) protein species obtained from protein aggregates (inclusion bodies-IBs) was followed. MMP-9 was recombinantly produced in the prokaryotic microbial cell factories Clearcoli (an engineered form of Escherichia coli) and Lactococcus lactis, mainly forming part of IBs and partially recovered under non-denaturing conditions. After the purification by affinity chromatography of solubilized MMP-9, four protein peaks were obtained. However, so far, the different conformational protein species forming part of IBs have not been isolated and characterized. Therefore, with the aim to link the physicochemical characteristics of the isolated peaks with their biological activity, we set up a methodological approach that included dynamic light scattering (DLS), circular dichroism (CD), and spectrofluorometric analysis confirming the separation of subpopulations of conformers with specific characteristics. In protein purification procedures, the detailed analysis of the individual physicochemical properties and the biological activity of protein peaks separated by chromatographic techniques is a reliable source of information to select the best-fitted protein populations.
Ayudas:	Ministerio de Economía y Competitividad RTA2015-00064-C02-01 Ministerio de Economía y Competitividad RTA2015-00064-C02-02 Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca 2017/SGR-229
Nota:	Altres ajuts: CERCA Programme/Generalitat de Catalunya
Derechos:	Aquest document està subjecte a una llicència d'ús Creative Commons. Es permet la reproducció total o parcial, la distribució, la comunicació pública de l'obra i la creació d'obres derivades, fins i tot amb finalitats comercials, sempre i quan es reconegui l'autoria de l'obra original.
Lengua:	Anglès
Documento:	Article ; recerca ; Versió publicada
Materia:	Inclusion bodies ; Affinity chromatography ; Dynamic light scattering ; The center of spectral mass ; Circular dichroism ; Protein conformers
Publicado en:	International journal of molecular sciences, Vol. 22, Issue 6 (March 2021) , art. 3020, ISSN 1422-0067

DOI: 10.3390/ijms22063020
PMID: 33809594

15 p, 1.7 MB

El registro aparece en las colecciones:
Documentos de investigación > Documentos de los grupos de investigación de la UAB > Centros y grupos de investigación (producción científica) > Ciencias de la salud y biociencias > Instituto de Biotecnología y de Biomedicina (IBB)
Artículos > Artículos de investigación
Artículos > Artículos publicados