| Publicació: |
[Barcelona] : Universitat Autònoma de Barcelona, 2019. |
| Descripció: |
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| Resum: |
La calidad de los oocitos juega un papel importante en la producción in vitro de embriones (PIVE). Factores intrínsecos y extrínsecos pueden alterar la calidad de los oocitos, afectando su competencia para el desarrollo. El objetivo del estudio fue evaluar el efecto de la suplementación con resveratrol durante la maduración in vitro (MIV) sobre la calidad de los oocitos en especies de interés veterinario. Tres estudios fueron llevados a cabo para testar el posible efecto beneficioso del resveratrol para la mejora de la competencia de desarrollo in vitro de los oocitos de mala calidad. Estudio I: PIVE de gatos domésticos obtenidos de ovarios refrigerados (4ºC) durante 24 y 48 horas. Los oocitos obtenidos de ovarios refrigerados fueron MIV con o sin 5μM de resveratrol. La competencia meiótica, niveles de especies reactivas de oxigeno (ROS) y glutatión (GSH), la tasa de blastocistos obtenidos y su calidad fueron evaluadas. Los resultados mostraron que el tratamiento con resveratrol no tenía efecto en la competencia meiótica de los oocitos. Los grupos tratados con resveratrol tenían menores niveles de ROS y mayores niveles de GSH comparado con los respectivos controles. Además, la suplementación con resveratrol incrementó significativamente la producción de blastocistos en el grupo refrigerado 48 horas y mejoró también la calidad de blastocistos en ambos grupos (24 y 48h). Estudio II: PIVE de oocitos de cabras prepúberes seleccionados mediante la tinción de brilliant cresyl blue (BCB). Después ser clasificados en: BCB+ (oocitos con crecimiento finalizado) y BCB- (oocitos en crecimiento) los oocitos fueron MIV con y sin 1μM de resveratrol. Los niveles de ROS, GSH, y ATP, la actividad y la distribución mitocondrial, la tasa de blastocistos obtenidos y su calidad fueron evaluadas. No se encontraron diferencias en los niveles de ROS, de ATP y la actividad mitocondrial entre grupos. Los niveles de GSH fueron significativamente mayores en ambos grupos tratados con resveratrol comparado con sus controles. Los oocitos tratados con resveratrol mostraron una proporción mayor de mitocondrias activas agrupadas comparado con los grupos control. La tasa de blastocistos fue significativamente mayor en los oocitos BCB+ madurados con resveratrol comparado con los demás grupos. Ninguna diferencia fue observada en la calidad de blastocistos entre grupos. Estudio III: Resultados de la fecundación in vitro (FIV) de oocitos de ovejas prepúberes expuestos a cadmio (Cd). Los oocitos fueron MIV en presencia de 2μM de cadmio y de diferentes concentraciones de resveratrol: 0μM (Cd), 1μM (Cd-Resv1μM) y 2μM (Cd-Resv2μM). Oocitos madurados sin Cd fueron usados como control. Los resultados de la FIV, la distribución de los gránulos corticales (CGs), los niveles de ROS y la distribución y actividad mitocondrial, fueron evaluados. Los grupos control, Cd-Resv1μM y Cd-Resv2μM tuvieron una mayor tasa de fertilización monospermal en comparación con el grupo Cd (P<0. 05). El porcentaje de oocitos en MII con los GCs distribuidos en el córtex fue mayor (P<0. 05) en los grupos control y Cd-Resv1μM que en el grupo Cd. El porcentaje de oocitos MII que exhibían una distribución homogénea de las mitocondrias en el citoplasma fue mayor en los grupos control, Cd-Resv1μM y Cd-Resv2μM que en el grupo Cd (P<0. 05). Menor actividad mitocondrial fue obtenida en los grupos control y Cd-Resv1μM comparado con el grupo Cd. Los niveles de ROS fueron menores en el control, Cd-Resv1μM y Cd-Resv2μM que en el grupo Cd. Concluyendo, la suplementación con resveratrol durante la MIV permite mejorar la calidad oocitaria y la PIVE en especies de interés veterinario, mediante la regulación del estado bioenergético/redox de los oocitos y la distribución citoplasmática de organelas. |
| Resum: |
The quality of oocytes plays a pivotal role in determining in vitro embryo production (IVEP) outcomes. Different intrinsic and extrinsic factors can impair the quality of mammalian oocytes, affecting their developmental competence. The aim of the study was to evaluate the effect of supplementation of resveratrol, a natural antioxidant, during in vitro maturation (IVM) on the quality of oocytes in species of veterinary interest (domestic cat, prepubertal goats and sheep). Three studies were performed to test the potential beneficial influence of resveratrol to improve the in vitro developmental competence of poor quality oocytes such as under sub-optimal condition or with low developmental competence. -STUDY I: IVEP from domestic cat oocytes retrieved from ovaries stored at 4°C for 24 and 48h. Oocytes retrieved from stored ovaries for 24 and 48h were IVM with or without 5μM resveratrol. Meiotic competence, intracellular levels of reactive oxygen species (ROS) and glutathione (GSH), blastocyst yield and the blastocyst cell number were evaluated. The results showed that resveratrol treatment had not effect on the meiotic competence of the oocytes. Resveratrol groups had lower (P<0. 05) intracellular ROS levels and higher (P<0. 05) GSH content compared to untreated oocytes, both at 24 and 48h. Moreover, resveratrol supplementation significantly increased blastocyst yield in 48h group and improves blastocyst cells number in both groups. -STUDY II: IVEP from prepubertal goat oocytes selected by brilliant cresyl blue (BCB) staining. Oocytes were classified by BCB staining as BCB+ (fully grown oocytes) or BCB- (growing oocytes) and IVM with or without 1μM resveratrol. ROS and GSH levels, mitochondrial activity and distribution and ATP content were analyzed in metaphase II oocytes (MII). After in vitro fertilization (IVF), the blastocyst rate and the blastocyst quality were assessed. No differences were found in ROS levels, ATP content and mitochondrial activity among groups. GSH levels were significantly higher in both BCB groups treated with resveratrol than their respective controls. Oocytes treated with resveratrol showed a higher proportion of clustered active mitochondria than control groups. The development to blastocyst stage was significantly higher in BCB+ oocytes matured with resveratrol compared with the other groups. No differences were observed in blastocyst quality among groups. -STUDY III: In vitro fertilization outcome of prepubertal sheep oocytes under cadmium exposure. Oocytes were expose to 2μM cadmium (Cd) and IVM in the presence of different concentration of resveratrol: 0μM (Cd), 1 μM (Cd-Resv1μM) and 2 μM (Cd-Resv2μM). Oocytes matured in absence of Cd were used as control. Fertilization outcomes, cortical granules (CGs) and mitochondria distribution, mitochondria activity and ROS level were evaluated. Oocytes of control, Cd-Resv1μM and Cd-Resv2μM groups had higher normal fertilization compared to Cd group (P<0. 05). The percentage of MII oocytes with CGs distributed in the cortex of the oocytes was higher (P<0. 05) in control and Cd-Resv1μM groups than Cd group. The percentage of MII oocytes that exhibited a homogeneous mitochondria distribution throughout the cytoplasm was higher in control, Cd-Resv 1μM and Cd-Resv2μM groups than Cd group (P<0. 05). Lower activity (P<0. 05) of mitochondria was recorded in control and Cd-Resv 1μM oocytes compared to Cd oocytes. The intracellular ROS levels were lower in control, Cd-Resv1μM and Cd-Resv2μM groups than Cd group. Taking all these results into account, we conclude that resveratrol supplementation during IVM constitutes a useful strategy to improve oocyte quality and IVEP outcome in species of veterinary interest. The mechanism underlying resveratrol effects included the regulation of bioenergetic/redox status of the oocytes by the modulation of ROS and GSH levels and mitochondria function and the distribution of cytoplasmic organelles. |
| Nota: |
Tesi. Doctorat. Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Ciència Animal i dels Aliments. 2019. |
| Drets: |
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| Llengua: |
Anglès |
| Document: |
Tesi doctoral ; Versió publicada |
| Matèria: |
Oòcits ;
Maduració ;
Investigació ;
Embriologia veterinària |
| ISBN: |
9788449087332 |
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