Real-time quantitative PCR-based system for determining transgene copy number in transgenic animals
Ballester Devis, Maria (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Ciència Animal i dels Aliments)
Castelló Farré, Anna (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Ciència Animal i dels Aliments)
Ibáñez, Elena (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Biologia Cel·lular, de Fisiologia i d'Immunologia)
Sánchez Bonastre, Armando (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Ciència Animal i dels Aliments)
Folch, Josep M. (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Ciència Animal i dels Aliments)

Fecha:	2004
Resumen:	In this paper, we describe a rapid and accurate real-time quantitative PCR-based system to determine transgene copy number in transgenic animals. We used the 2 method to analyze different transgenic lines without the requirement of a control sample previously determined by Southern blot analysis. To determine the transgene copy number in several mouse lines carrying a goat β-Lactoglobulin transgene, we developed a TaqMan® assay in which a goat genomic DNA sample was used as a calibrator. Moreover, we used the glucagon gene as a reference control because this gene is highly conserved between species and amplifies with the same efficiency and sensitivity in goat as in mouse. With this assay, we provide an alternative simple method to determine the transgene copy number, avoiding the traditional and tedious blotting techniques. The assay's discrimination ability from our results is of at least six copies and, similar to the limitations of the blotting techniques, the accuracy of the quantification diminishes when the transgene copy number is high.
Ayudas:	Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca AGL2000-0687
Derechos:	Aquest document està subjecte a una llicència d'ús Creative Commons. Es permet la reproducció total o parcial, la distribució, la comunicació pública de l'obra i la creació d'obres derivades, fins i tot amb finalitats comercials, sempre i quan es reconegui l'autoria de l'obra original.
Lengua:	Anglès
Documento:	Article ; recerca ; Versió publicada
Materia:	Glucagon gene ; Southern blot analysis ; Transgene copy number ; Transgenic animals
Publicado en:	BioTechniques, Vol. 37 Núm. 4 (october 2004) , p. 610-613, ISSN 0736-6205

DOI: 10.2144/04374st06

4 p, 185.6 KB

El registro aparece en las colecciones:
Artículos > Artículos de investigación
Artículos > Artículos publicados