Enhanced recombinant protein capture, purity and yield from crude bacterial cell extracts by N-Lauroylsarcosine-assisted affinity chromatography
Carratalá, José Vicente (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia)
Atienza-Garriga, Jan (Universitat Autònoma de Barcelona. Institut de Biotecnologia i de Biomedicina "Vicent Villar Palasí")
López-Laguna, Hèctor (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia)
Vázquez Gómez, Esther (Universitat Autònoma de Barcelona. Institut de Biotecnologia i de Biomedicina "Vicent Villar Palasí")
Villaverde Corrales, Antonio (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia)
Sanchez, Julieta M (Universitat Autònoma de Barcelona. Institut de Biotecnologia i de Biomedicina "Vicent Villar Palasí")
Ferrer-Miralles, Neus (Universitat Autònoma de Barcelona. Departament de Genètica i de Microbiologia)

Data:	2023
Resum:	Background: Recombinant proteins cover a wide range of biomedical, biotechnological, and industrial needs. Although there are diverse available protocols for their purification from cell extracts or from culture media, many proteins of interest such as those containing cationic domains are difficult to purify, a fact that results in low yields of the final functional product. Unfortunately, this issue prevents the further development and industrial or clinical application of these otherwise interesting products. Results: Aiming at improving the purification of such difficult proteins, a novel procedure has been developed based on supplementing crude cell extracts with non-denaturing concentrations of the anionic detergent N-Lauroylsarcosine. The incorporation of this simple step in the downstream pipeline results in a substantial improvement of the protein capture by affinity chromatography, an increase of protein purity and an enhancement of the overall process yield, being the detergent not detectable in the final product. Conclusion: By taking this approach, which represents a smart repurposing of N-Lauroylsarcosine applied to protein downstream, the biological activity of the protein is not affected. Being technologically simple, the N-Lauroylsarcosine-assisted protein purification might represent a critical improvement in recombinant protein production with wide applicability, thus smothering the incorporation of promising proteins into the protein market.
Ajuts:	Agencia Estatal de Investigación PID2020-116174RB-I00 Agencia Estatal de Investigación PID2019-105416RB-I00 Agencia Estatal de Investigación PDC2022-133858-I00 Agencia Estatal de Investigación PID2019-107298RB-C22 Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca 2021/SGR-00092 Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades FPU20/02260 Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca 2019/FI_B 00352
Nota:	Altres ajuts: Margarita Salas grant for the training of young doctoral graduates (722713); María Zambrano postdoctoral researcher contract (677904)
Drets:	Aquest document està subjecte a una llicència d'ús Creative Commons. Es permet la reproducció total o parcial, la distribució, la comunicació pública de l'obra i la creació d'obres derivades, fins i tot amb finalitats comercials, sempre i quan es reconegui l'autoria de l'obra original.
Llengua:	Anglès
Document:	Article ; recerca ; Versió publicada
Matèria:	Recombinant proteins ; Difcult-to-purify proteins ; E. coli ; H6 tag ; Detergent ; Repurposing
Publicat a:	Microbial cell factories, Vol. 22, Issue 1 (April 2023) , art. 81, ISSN 1475-2859

DOI: 10.1186/s12934-023-02081-7
PMID: 37098491

14 p, 1.9 MB

El registre apareix a les col·leccions:
Documents de recerca > Documents dels grups de recerca de la UAB > Centres i grups de recerca (producció científica) > Ciències de la salut i biociències > Institut de Biotecnologia i de Biomedicina (IBB)
Articles > Articles de recerca
Articles > Articles publicats