Unraveling the effect of silent, intronic and missense mutations on VWF splicing : contribution of next generation sequencing in the study of mRNA
Borràs, Nina (Hospital Universitari Vall d'Hebron. Institut de Recerca)
Orriols, Gerard (Institut d'Investigació Biomèdica Sant Pau)
Batlle, Javier (Complejo Hospitalario Universitario de A Coruña)
Pérez-Rodríguez, Almudena (Complejo Hospitalario Universitario de A Coruña)
Fidalgo, Teresa (Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (Coimbra, Portugal))
Martinho, Patrícia (Centro Hospitalar e Universitário de Coimbra (Coimbra, Portugal))
López-Fernández, María Fernanda (Complejo Hospitalario Universitario de A Coruña)
Rodríguez-Trillo, Ángela (Complejo Hospitalario Universitario de A Coruña)
Lourés, Esther (Complejo Hospitalario Universitario de A Coruña)
Parra, Rafael (Hospital Universitari Vall d'Hebron. Institut de Recerca)
Altisent, Carmen (Hospital Universitari Vall d'Hebron. Institut de Recerca)
Cid, Ana Rosa (Hospital Universitari i Politècnic La Fe (València))
Bonanad, Santiago (Hospital Universitari i Politècnic La Fe (València))
Cabrera, Noelia (Hospital Universitari i Politècnic La Fe (València))
Moret, Andrés (Hospital Universitari i Politècnic La Fe (València))
Mingot-Castellano, María Eva (Hospital Regional Universitario de Málaga)
Navarro, Nira (Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrín)
Pérez-Montes, Rocío (Hospital Universitario Marqués de Valdecilla (Santander, Cantabria))
Marcellin, Sally (Salud Castilla y León, Segovia, Spain)
Moreto, Ana (Hospital Universitario de Cruces (Barakaldo, País Basc))
Herrero, Sonia (Hospital Universitario de Guadalajara)
Soto, Inmaculada (Hospital Universitario Central de Asturias)
Fernández-Mosteirín, Núria (Hospital Universitario Miguel Servet (Saragossa))
Jiménez-Yuste, Víctor (Hospital Universitario La Paz (Madrid))
Alonso, Nieves (Complejo Hospitalario Infanta Cristina (Badajoz))
de Andrés Jacob, Aurora (Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de Compostela)
Fontanes, Emilia (Hospital Universitario Lucus Augusti (Lugo))
Campos, Rosa (Hospital Universitario de Jerez (Jerez de la Frontera))
Paloma, María José (Hospital Virgen del Camino (Pamplona))
Bermejo, Nuria (Hospital San Pedro de Alcántara)
Berrueco, Rubén (Hospital Sant Joan de Déu (Barcelona, Catalunya))
Mateo, José (Institut d'Investigació Biomèdica Sant Pau)
Arribalzaga, Karmele (Hospital Universitario Fundación Alcorcón)
Marco, Pascual (Hospital General Universitario de Alicante (Alacant, País Valencià))
Palomo Bravo, Ángeles (Hospital Regional Universitario Carlos Haya (Málaga))
Quismondo, Nerea Castro (Hospital Universitario 12 de Octubre (Madrid))
Iñigo, Belén (Hospital Clínico San Carlos (Madrid))
Nieto Hernández, Maria del Mar (Complejo Hospitalario de Jaén)
Vidal, Rosa (Hospital Universitario Fundación Jiménez Díaz)
Martínez, María Paz (Hospital Nuestra Señora de Sonsoles (Àvila))
Aguinaco, Reyes (Hospital Universitari Joan XXIII de Tarragona)
Tenorio, Jesús María (Hospital Montecelo de Pontevedra)
Ferreiro, María (Hospital Montecelo de Pontevedra)
García-Frade, Javier (Hospital Universitario Río Hortega (Valladolid))
Rodríguez-Huerta, Ana María (Hospital General Universitario Gregorio Marañón)
Cuesta, Jorge (Hospital Virgen de la Salud (Toledo))
Rodríguez-González, Ramón (Hospital Universitario Severo Ochoa)
García-Candel, Faustino (Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca (Múrcia))
Dobón, Manuela (Hospital Clínico Universitario "Lozano Blesa" de Zaragoza)
Aguilar Franco, Carlos (Hospital Santa Bárbara (Soria))
Vidal, Francisco (Hospital Universitari Vall d'Hebron. Institut de Recerca)
Corrales Insa, Irene (Hospital Universitari Vall d'Hebron. Institut de Recerca)
Universitat Autònoma de Barcelona

Data:	2019
Resum:	Large studies in von Willebrand disease patients, including Spanish and Portuguese registries, led to the identification of >250 different mutations. It is a challenge to determine the pathogenic effect of potential splice site mutations on VWF mRNA. This study aimed to elucidate the true effects of 18 mutations on VWF mRNA processing, investigate the contribution of next-generation sequencing to in vivo mRNA study in von Willebrand disease, and compare the findings with in silico prediction. RNA extracted from patient platelets and leukocytes was amplified by RT-PCR and sequenced using Sanger and next generation sequencing techniques. Eight mutations affected VWF splicing: c. 1533+1G>A, c. 5664+2T>C and c. 546G>A (p. =) prompted exon skipping; c. 3223-7_3236dup and c. 7082-2A>G resulted in activation of cryptic sites; c. 3379+1G>A and c. 7437G>A) demonstrated both molecular pathogenic mechanisms simultaneously; and the p. Cys370Tyr missense mutation generated two aberrant transcripts. Of note, the complete effect of three mutations was provided by next generation sequencing alone because of low expression of the aberrant transcripts. In the remaining 10 mutations, no effect was elucidated in the experiments. However, the differential findings obtained in platelets and leukocytes provided substantial evidence that four of these would have an effect on VWF levels. In this first report using next generation sequencing technology to unravel the effects of VWF mutations on splicing, the technique yielded valuable information. Our data bring to light the importance of studying the effect of synonymous and missense mutations on VWF splicing to improve the current knowledge of the molecular mechanisms behind von Willebrand disease. identifier:02869074.
Ajuts:	Ministerio de Economía y Competitividad ISCIII/PI12-01494 Ministerio de Economía y Competitividad ISCIII/PI15-01643 Ministerio de Economía y Competitividad ISCIII/RD12-0042-0053
Drets:	Aquest document està subjecte a una llicència d'ús Creative Commons. Es permet la reproducció total o parcial, la distribució, la comunicació pública de l'obra i la creació d'obres derivades, sempre que no sigui amb finalitats comercials, i sempre que es reconegui l'autoria de l'obra original.
Llengua:	Anglès
Document:	Article ; recerca ; Versió publicada
Publicat a:	Haematologica, Vol. 104 (march 2019) , p. 587-598, ISSN 1592-8721

DOI: 10.3324/haematol.2018.203166
PMID: 30361419

12 p, 2.5 MB

El registre apareix a les col·leccions:
Documents de recerca > Documents dels grups de recerca de la UAB > Centres i grups de recerca (producció científica) > Ciències de la salut i biociències > Institut de Recerca Sant Pau
Articles > Articles de recerca
Articles > Articles publicats